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當(dāng)前位置:首頁 > 產(chǎn)品中心 > 實(shí)驗(yàn)試劑 > 其他試劑 > M3029.0100含紅色染料的 RedMasterMix (2x) Taq PCR MasterMix

含紅色染料的 RedMasterMix (2x) Taq PCR MasterMix

簡(jiǎn)要描述:Genaxxon我們?yōu)榭蛻籼峁┏^18年的高質(zhì)量PCR和qPCR產(chǎn)品的廣泛組合。 Genaxxon銷售 Genaxxon產(chǎn)品供應(yīng) 含紅色染料的 RedMasterMix (2x) Taq PCR MasterMix

  • 產(chǎn)品型號(hào):M3029.0100
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時(shí)間:2025-05-12
  • 訪  問  量:434

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌貨號(hào)M3029
供貨周期現(xiàn)貨應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥


含紅色染料的 RedMasterMix (2x) Taq PCR MasterMix  產(chǎn)品編號(hào): M3029.0100

含紅色染料的 RedMasterMix (2x) Taq PCR MasterMix


優(yōu)勢(shì)一覽

  • 輕松跟蹤移液步驟

  • 穩(wěn)健的性能 – 高度穩(wěn)定的 PCR 預(yù)混液

  • 菌落篩選 – 針對(duì)快速篩選進(jìn)行了優(yōu)化

  • 無需額外步驟 – 已包含上樣緩沖液

  • 方便的規(guī)格 – 1.5 mL 等分試樣大小,易于作

產(chǎn)品信息 “RedMasterMix (2x) Taq PCR MasterMix with Red Dye"

含紅色染料的 PCR MasterMix,用于移液步驟的視覺控制:PCR 后,無需添加電荷緩沖液即可進(jìn)行電泳。這使得該 PCR 預(yù)混液 (2x) 節(jié)省了時(shí)間和成本。含紅色染料的 PCR RedMasterMix (2x) 還具有高度特異性的特點(diǎn),可獲得最佳結(jié)果。

PCR MasterMix (2x) 是以下成分的優(yōu)化(即用型)混合物:

- Taq DNA 聚合酶
- dNTP
- MgCl2
- 紅色染料
- 反應(yīng)緩沖液

用于使用 PCR 高效擴(kuò)增 DNA 模板。您所要做的就是添加引物和模板 DNA。同時(shí),PCR 預(yù)混液含有添加劑和紅色染料,這使得無需添加電荷緩沖液即可進(jìn)行后續(xù)電泳。該 PCR RedMastermix 專為擴(kuò)增子長度達(dá) 4 kb 的常規(guī) PCR 而開發(fā)。緩沖液的特殊成分保證了即使在反復(fù)解凍和冷凍循環(huán)后也能獲得可重復(fù)的結(jié)果。

含 Red 染料的 PCR 預(yù)混液以 1.25 mL 的方便等分試樣運(yùn)輸。

我們的 RedMastermix 也可用于 Sanger 測(cè)序。為此,請(qǐng)?jiān)?PCR 后以 1:8 的比例稀釋 PCR 混合物,或用離心柱純化,然后應(yīng)用。


規(guī)格:
用于 PCR 的 2 次即用型預(yù)混液,包括用于更好地觀察移液的紅色染料和凝膠上樣染料。已包括 dNTP、緩沖液和 DNA 聚合酶。

方便的等分試樣大小:1.25 mL。該預(yù)混液在 +2°C 至 +8°C 下可穩(wěn)定保存至少 8 個(gè)月。


應(yīng)用:

用于小鼠尾巴的可靠 PCR。用于 Sanger 測(cè)序反應(yīng)。


Einheiten / Units:

One unit is defined as the amount of enzyme which will convert 10 nmoles of dNTPs to an acid-insoluble form in 30 min at 72°C under the assay conditions (25 mM TAPS (tris-(hydroxymethyl)-methyl-amino-propanesulfonic acid, sodium salt) pH 9.3 (25°C); 50 mM KCl; 2 mM MgCl2; 1 mM b-mercaptoethanol; and activated calf thymus DNA as substrate.

Quelle / Source:

synthetic


Sicherheits Hinweise / Safety


Klassifizierungen / Classification

eclass-Nr: 32-16-05-02



技巧

對(duì)于每個(gè)模板/引物對(duì),必須憑經(jīng)驗(yàn)評(píng)估最佳反應(yīng)條件,例如通過改變引物與模板的比例或離子強(qiáng)度(使用 MgSO4)和循環(huán)參數(shù)(時(shí)間和溫度)。

DNA 模板

  • GENAXXON Red 預(yù)混液特別適用于不太干凈的鼠尾 DNA

  • 關(guān)于 10E4需要靶 DNA 的拷貝才能在 25-30 個(gè)循環(huán)后獲得可檢測(cè)的產(chǎn)物。

  • 使用 1pg–1ng 質(zhì)粒 DNA 或病毒 DNA。

  • 使用 1ng–1 μg 用于基因組 DNA。

  • 較高的 DNA 濃度會(huì)降低擴(kuò)增子特異性,并導(dǎo)致額外的條帶,尤其是當(dāng)使用大量循環(huán)時(shí)。

  • 如果需要較少的循環(huán)次數(shù),例如為了提高特異性,可以使用更高的 DNA 濃度。

底漆

  • 一般來說,這些應(yīng)該有 20-30 個(gè)核苷酸的長度。

  • 理想的 GC 含量為 40-60%。

  • GC 堿基應(yīng)盡可能均勻地分布在引物上。

  • 引物對(duì)的兩種引物的熔解溫度相差不應(yīng)超過 5°C。

  • 避免引物內(nèi)的二級(jí)結(jié)構(gòu)(例如發(fā)夾)以及所用引物對(duì)之間潛在的二聚化區(qū)域。

  • 如果將轉(zhuǎn)基因位點(diǎn)(側(cè)面定向誘變)摻入引物中,那么最好在距離側(cè)面定向誘變位點(diǎn) 5' 處插入 4-6 個(gè)額外的堿基,以便引物可以在正確的位置退火。

  • 每種引物的最終濃度應(yīng)在 0.05-1 μM 之間(0.05 μM 是下限),典型值在 0.1 至 0.5 μM 之間。

  • 較高的濃度會(huì)導(dǎo)致引物二聚化增加,并“產(chǎn)生"或模擬假擴(kuò)增產(chǎn)物。

  • 在引物和探針的情況下,可以假設(shè)隨著引物量的增加,PCR 一開始當(dāng)然也會(huì)運(yùn)行得更好(通常一開始會(huì)預(yù)期 Ct 值會(huì)更早)。然而,隨著濃度的持續(xù)增加,PCR 達(dá)到飽和。除了略低的 Ct 值外,熒光信號(hào)通常也在開始時(shí)以較高的引物/探針濃度被放大。

  • 此外,可以添加一個(gè)或多個(gè)探針(應(yīng)始終充分測(cè)試必要的濃度)。我們建議在 50-500 nM 之間。在這方面,應(yīng)測(cè)試不同的組合。

鎂濃度

  • 1.5-2.0 mM Mg2 + 是 Taq DNA 聚合酶作用的選擇,但最佳 Mg2 + 濃度在很大程度上取決于模板、緩沖液組成、DNA 量以及 dNTP,因?yàn)楹髢烧哂绕渚哂序湘V的高傾向,從而將其從 PCR 反應(yīng)中吸收。

  • 如果 [Mg2+] 太低:不可見 PCR 產(chǎn)物。

  • 如果 [Mg2+] 過高:可以看到不需要/不正確的 PCR 產(chǎn)物。可能只能看到涂片。

脫氧核苷酸 (dNTPs >)

  • 典型濃度為 200 μM 每個(gè)單獨(dú)的 dNTP。然而,原則上,200-400 μM 的 dNTP 是 PCR 的良好濃度。

  • 50-100 μM 的較低濃度會(huì)增加特異性,但在某些情況下會(huì)顯著降低產(chǎn)量。

  • 較高的濃度會(huì)增加產(chǎn)量,尤其是對(duì)于長擴(kuò)增子,但會(huì)顯著降低特異性。

DNA 聚合酶

  • 選擇正確的聚合酶取決于預(yù)期用途和所使用的模板(標(biāo)準(zhǔn) PCR:高準(zhǔn)確度的 Taq DNA 聚合酶 S >,高產(chǎn)量的 Taq 聚合酶 E >;預(yù)混液:標(biāo)準(zhǔn) PCR MasterMix >Red MasterMix >含紅色染料)。

  • 對(duì)于多重 PCR,有特殊的凍干多重 MasterMixe >

  • 為了提高特異性或?qū)τ诶щy的模板,建議使用熱啟動(dòng)應(yīng)用程序。為此,>有特殊的熱啟動(dòng)聚合酶

  • 對(duì)于用于克隆或其他需要低錯(cuò)誤率的方法的 PCR,熱穩(wěn)定的高保真校正聚合酶,如
    Pfunds >、ExactRun >、ReproFast >ReproHot (KOD) 校正聚合酶>。這些酶在擴(kuò)增過程中的錯(cuò)誤要少得多,并增加了無錯(cuò)誤擴(kuò)增子的機(jī)會(huì)。

  • 對(duì)于基因分型和其他需要高鑒別度的應(yīng)用,有一種新型高選擇性 DNA 聚合酶 SNP Pol DNA 聚合酶 >。它特異性地區(qū)分錯(cuò)配的引物模板復(fù)合物,并特異性地僅提供具有*全匹配引物對(duì)的 PCR 產(chǎn)物。

  • 對(duì)于實(shí)時(shí)定量 PCR >,有高度專業(yè)化的 qPCR 預(yù)混液。在這里,選擇合適的預(yù)混液取決于所使用的 qPCR 設(shè)備。例如,重要的是要注意 qPCR 預(yù)混液中是否應(yīng)包含 ROX 以及應(yīng)包含多少 ROX,以及它是帶有綠色熒光染料>的 Green qPCR Mastermix 還是不含熒光染料的 Probe qPCR MasterMix >。也可提供在室溫下穩(wěn)定的微珠凍干 (LyoBalls >)。

  • PCR 反應(yīng)中使用的 DNA 聚合酶量會(huì)顯著影響 PCR 結(jié)果(對(duì)于 50 μL 方法,使用 1.25 - 1.5 單位 Taq 聚合酶>)。

退火

  • 退火溫度應(yīng)通過溫度梯度進(jìn)行優(yōu)化。退火期也會(huì)影響成功。確實(shí),使用不同的預(yù)混液或使用其他供應(yīng)商的反應(yīng)緩沖液會(huì)對(duì)退火溫度產(chǎn)生嚴(yán)重影響。

  • 引物對(duì)的兩種引物的熔解溫度相差不應(yīng)超過 5°C。

  • 典型的退火溫度比所用引物的*低 Tm 低約 5°C。溫度通常下降到 50-60°C 之間。

  • 如果存在非特異性條帶或潤滑,則應(yīng)測(cè)試更高的退火溫度。

  • 典型的退火時(shí)間在 15-30 秒范圍內(nèi)。

延伸溫度和時(shí)間

  • 擴(kuò)增子延伸通常在 68°C 下進(jìn)行。

  • 作為一般規(guī)則,可以假設(shè)每 1000 個(gè)堿基對(duì)的標(biāo)準(zhǔn) Taq 聚合酶在 68°C 下的延伸時(shí)間為 1 分鐘(或 2000 個(gè)堿基對(duì)為 2 分鐘,或 3000 個(gè)堿基對(duì)為 3 分鐘)。

  • 對(duì)于小于 1 kb 的 PCR 產(chǎn)物,可以采取 45-60 秒(如果不是接近 1 kb 的擴(kuò)增子,則更像是 45 秒)。

  • 超過 3000 個(gè)堿基對(duì)的 PCR 產(chǎn)物和超過 30 個(gè)循環(huán)的 PCR 方案都可能需要更長的延伸時(shí)間。因此,應(yīng)再次優(yōu)化更長的擴(kuò)增子或更高的循環(huán)數(shù)。

擴(kuò)增具有高 GC 含量、強(qiáng)二級(jí)結(jié)構(gòu)、低濃度或大于 5 kb 的擴(kuò)增子的模板通常需要優(yōu)化 PCR 條件。通常,在 PCR 過程中應(yīng)在 95°C 下進(jìn)行 15-30 秒的變性。


上海牧榮生物科技有限公司 是一家專注于分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)菌學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)、細(xì)胞治療、臨床應(yīng)用等領(lǐng)域,以銷售為主的生物技術(shù)公司。銷售的產(chǎn)品涉及,細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備等。客戶遍布大學(xué)、研究所、醫(yī)院、衛(wèi)生防疫、商品檢驗(yàn)檢疫、制藥公司、生物技術(shù)公司和食品工業(yè)等單位。

含紅色染料的 RedMasterMix (2x) Taq PCR MasterMix

















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