N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG）試劑盒

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

NAG是溶酶體中的一種酸性水解酶，廣泛存在于各種組織、體液和細胞中，以前列腺和腎近曲小管細胞內含量最高。NAG活性變化與機體某些病理狀態密切相關。

測定原理：

NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算NAG活性。

自備用品：

酶標儀/可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。

試劑二：液體4mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體13mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1. 酶標儀或分光光度計預熱30min以上，調節波長至400nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定（在EP管或96孔板中依次加入下列試劑）：

迅速混勻，放入37℃保溫30min

充分混勻， 400nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。

NAG活性計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸方程為y = 0.00585x +0.0083；x為標準品濃度（nmol/mL），y為吸光值。

2、血清（漿）NAG活力的計算

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷V樣÷T =39.89×(ΔA-0.0083)

3、細胞、細菌和組織中NAG活力的計算

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T

=39.89×(ΔA-0.0083) ÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG活性(nmol/min/g鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=39.89×(ΔA-0.0083)÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T

=0.08×(ΔA-0.0083)

V反總：反應體系總體積，0.07mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數，500萬；T：反應時間，30min。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0039x +0.0083；x為標準品濃度（nmol/mL），y為吸光值。

2、血清（漿）NAG活力的計算

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷V樣÷T =59.83×(ΔA-0.0083)

3、細胞、細菌和組織中NAG活力的計算

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T

=59.83×(ΔA-0.0083) ÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG活性(nmol/min/g鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=59.83×(ΔA-0.0083)÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。

NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T

=0.12×(ΔA-0.0083)

V反總：反應體系總體積，0.07mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數，500萬；T：反應時間，30min。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為客戶全面解決實驗、生產、開發需求。公司整合國際與國內資源，加強網絡建設，提高公司內部運作效率，為客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為客戶提供優惠的價格。

N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG）試劑盒