了解給定細(xì)胞群的數(shù)量和特征對于許多細(xì)胞/分子生物學(xué)研究至關(guān)重要。許多領(lǐng)域，如免疫學(xué)，在很大程度上依賴于量化群體中細(xì)胞數(shù)量以及這些細(xì)胞所具有的各種特征的能力。

血細(xì)胞計數(shù)器：一種傳統(tǒng)的細(xì)胞計數(shù)方法

多年來，已經(jīng)開發(fā)出許多技術(shù)，使科學(xué)家能夠提出和回答這些問題。一種非常古老的技術(shù)是血細(xì)胞計數(shù)器，它允許科學(xué)家手動計數(shù)指定體積的細(xì)胞。簡單地說，血細(xì)胞計數(shù)器上的不同網(wǎng)格和正方形由精確的表面積定義。表面積乘以網(wǎng)格上方蓋玻片的高度，可提供精心指定的體積。

血細(xì)胞計數(shù)器的不精確性是由一些更現(xiàn)代的技術(shù)改進(jìn)的因素引起的。例如，依靠人類對網(wǎng)格上微小物體的解釋會引入用戶之間的差異，這會根據(jù)多年的經(jīng)驗(yàn)進(jìn)一步分層。載玻片的不加工意味著腔室高度很少是真正的 100 μm，這會給方程增加假設(shè)，從而導(dǎo)致與真實(shí)計數(shù)的總體偏差。

細(xì)胞計數(shù)的現(xiàn)代解決方案

自動細(xì)胞計數(shù)儀

像 CellDrop 這樣的自動細(xì)胞計數(shù)儀通過利用算法每次以相同的方式計數(shù)來克服這些挑戰(zhàn)。CellDrop 的DirectPipette™ 技術(shù)還利用高精度電機(jī)將 100 μm 的精確腔室高度設(shè)置為 100 μm，每次都好的。自動細(xì)胞計數(shù)儀還受益于快速圖像采集，消除用戶偏差并顯著提高實(shí)驗(yàn)的一致性。

流式細(xì)胞儀

流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞計數(shù)的另一種現(xiàn)代解決方案是流式細(xì)胞儀。流式細(xì)胞儀通過毛細(xì)管吸入細(xì)胞，然后將每個細(xì)胞以單條文件線通過一系列激光器，從而快速分析大量單個細(xì)胞。這些激光器除了檢測前向散射（細(xì)胞直徑）和側(cè)向散射（細(xì)胞密度或體積）外，還可以檢測與細(xì)胞表面結(jié)合的熒光團(tuán)。

流式細(xì)胞術(shù)可實(shí)現(xiàn)高通量分析，快速表征數(shù)千至數(shù)百萬個細(xì)胞，促進(jìn)高效的數(shù)據(jù)采集。通常，分析設(shè)置為運(yùn)行到達(dá)到指定數(shù)量的細(xì)胞，例如，100 萬個細(xì)胞。靶向表面蛋白的熒光抗體使研究人員能夠闡明不同亞群中細(xì)胞的百分比，從而識別所分析的總樣品中的各種細(xì)胞類型。

流式細(xì)胞儀在細(xì)胞計數(shù)中的局限性

與任何技術(shù)一樣，流式細(xì)胞儀也有局限性。雖然流式細(xì)胞儀在了解內(nèi)部檢測器經(jīng)過的事件數(shù)量方面表現(xiàn)出色，但了解包含這些事件的精確進(jìn)氣量卻不太容易測量。對于某些流式細(xì)胞儀，內(nèi)部流體泵可以每年校準(zhǔn)一次，以確保進(jìn)氣量足夠精確，從而得出準(zhǔn)確的細(xì)胞計數(shù)。通常，泵不容易校準(zhǔn)或根本沒有校準(zhǔn)，這可能導(dǎo)致細(xì)胞/mL 定量不準(zhǔn)確。此外，傳統(tǒng)的流式細(xì)胞儀通常缺乏提供空間信息或詳細(xì)單細(xì)胞圖像的能力。

補(bǔ)充技術(shù)：流式細(xì)胞術(shù)和成像

為了克服這些限制，專家們經(jīng)常用成像流式細(xì)胞術(shù)來補(bǔ)充流式細(xì)胞術(shù)。成像流式細(xì)胞儀將高分辨率圖像捕獲與傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)原理相結(jié)合，可進(jìn)行詳細(xì)的流式細(xì)胞術(shù)圖像分析。這提供了有價值的空間信息和細(xì)胞群熒光強(qiáng)度的量化，顯著增強(qiáng)了細(xì)胞分析能力。成像流式細(xì)胞術(shù)還可以清楚地區(qū)分紅細(xì)胞和有核細(xì)胞，這對于準(zhǔn)確的細(xì)胞計數(shù)至關(guān)重要。

許多流式細(xì)胞術(shù)專家使用的另一種實(shí)用解決方案是在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行測量之前，使用另一種方法（例如自動細(xì)胞計數(shù)儀）對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。這結(jié)合了兩種技術(shù)的優(yōu)勢，提供了精確的量化和詳細(xì)的表征。

對具有 AO/PI 等熒光活力染色劑的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)可產(chǎn)生清晰的熒光圖像，從而直觀地確認(rèn)細(xì)胞活力狀態(tài)。有關(guān) AO/PI 染色如何為活力評估提供可靠樣本圖像的更多詳細(xì)信息，請閱讀此技術(shù)文檔。當(dāng)隨后通過流式細(xì)胞儀分析相同的細(xì)胞群時，屬于每個亞群的細(xì)胞百分比變得清晰。該數(shù)據(jù)可以與活細(xì)胞濃度相結(jié)合，以確定所分析的每個類別中的細(xì)胞數(shù)量。

總結(jié)

每個工具都有其擅長的特定用途。雖然許多工具可以用來完成它們不是為之設(shè)計的任務(wù)，但它們通常無法像專門為這項(xiàng)工作構(gòu)建的工具那樣出色。

這一原則適用于生物學(xué)中不同的細(xì)胞分析方法。沒有一種工具在所有方面都好。相反，每項(xiàng)技術(shù)都與其他技術(shù)相輔相成，在特定領(lǐng)域表現(xiàn)出色并提供最佳數(shù)據(jù)。

通過結(jié)合基于圖像的細(xì)胞計數(shù)和流式細(xì)胞術(shù)等強(qiáng)大的分析工具 ，可以實(shí)現(xiàn)最準(zhǔn)確的細(xì)胞群定量和詳細(xì)的表征，從而顯著有利于生物醫(yī)學(xué)研究。