Cytion 為細(xì)胞系培養(yǎng)提供全面的指南，強(qiáng)調(diào)無(wú)菌和無(wú)菌技術(shù)的重要性。我們的方案可確保在一系列細(xì)胞類型和應(yīng)用中成功進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。

1. 實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

設(shè)計(jì)組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室需要周密的規(guī)劃，以確保在安全高效的環(huán)境中生產(chǎn)高質(zhì)量的材料。最佳設(shè)施包括用于檢疫和處理未受污染材料的不同區(qū)域，每個(gè)區(qū)域都有專用的培養(yǎng)箱。當(dāng)空間不允許按區(qū)域分開(kāi)時(shí)，建議在時(shí)間上分開(kāi)處理不同的材料。嚴(yán)格的清潔方案和至少遵守 2 類密封水平對(duì)于最大限度地降低污染風(fēng)險(xiǎn)和維持受控的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境至關(guān)重要。

2. 建立無(wú)菌工作空間

• 引擎蓋實(shí)踐：通過(guò)正確定位引擎蓋窗扇并避免雜亂來(lái)保持層流氣流。

• 滅菌：移液器吸頭、玻璃移液器等高壓滅菌工具，并使用70%乙醇進(jìn)行表面消毒。

3. 介質(zhì)和試劑制備

• 培養(yǎng)基選擇：查閱我們?cè)敿?xì)的培養(yǎng)基圖表，將您的細(xì)胞系與適當(dāng)?shù)?DMEM 或 RPMI 培養(yǎng)基相匹配，并輔以胎牛血清 (FBS) 和谷氨酰胺等添加劑。

• 補(bǔ)充劑的無(wú)菌性：所有培養(yǎng)基和補(bǔ)充劑必須無(wú)菌，必要時(shí)采用過(guò)濾滅菌。

• 個(gè)人防護(hù)裝備：在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中，最大限度地減少傷害依賴于嚴(yán)格遵守個(gè)人防護(hù)裝備，例如符合 EN374-3 標(biāo)準(zhǔn)的手套。

• 消毒：最大限度地減少傷害還取決于正確使用次氯酸鈉或乙醇等消毒劑。為了實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生的全面安全性和有效性，下表詳細(xì)介紹了其他消毒劑及其具體使用案例：

 4. 培養(yǎng)環(huán)境設(shè)置

• 用于貼壁細(xì)胞系的燒瓶：經(jīng)過(guò)組織培養(yǎng)處理的燒瓶通常足以容納大多數(shù)細(xì)胞系。對(duì)于需要額外支持的某些細(xì)胞類型，可以對(duì)燒瓶進(jìn)行預(yù)處理或用明膠或纖連蛋白等底物包被。這些涂層可以顯著改善細(xì)胞附著和增殖。詳細(xì)的制備和包衣方案可在相應(yīng)的產(chǎn)品信息表中找到。

• 用于懸浮細(xì)胞系的燒瓶：使用專為非貼壁細(xì)胞設(shè)計(jì)的燒瓶，可使其自由移動(dòng)和充分的氣體交換。這些燒瓶不需要促進(jìn)細(xì)胞附著的表面處理。

5. 監(jiān)測(cè)細(xì)胞健康狀況

維持細(xì)胞培養(yǎng)的健康是細(xì)胞培養(yǎng)工作的一個(gè)重要方面。持續(xù)監(jiān)測(cè)對(duì)于確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的完整性和可重復(fù)性至關(guān)重要。以下是監(jiān)測(cè)細(xì)胞健康狀況的詳細(xì)做法：

5.1.每日檢查

• 顯微鏡評(píng)估：每天使用顯微鏡檢查細(xì)胞，評(píng)估細(xì)胞健康的關(guān)鍵指標(biāo)，包括一致的細(xì)胞附著、特征形態(tài)和預(yù)期的生長(zhǎng)模式。尋找細(xì)胞大小和形狀的均勻性、是否存在不同的細(xì)胞核以及是否缺乏可能表明細(xì)胞死亡的顆粒度。

• 生長(zhǎng)率監(jiān)測(cè)：跟蹤增殖率，確保其與細(xì)胞系的預(yù)期倍增時(shí)間一致。生長(zhǎng)速率的突然變化可能表明細(xì)胞健康或培養(yǎng)條件存在潛在問(wèn)題。

• 培養(yǎng)基評(píng)估：檢查培養(yǎng)基的顏色，它可以指示 pH 值的變化。泛黃的培養(yǎng)基表明酸度增加，通常是細(xì)胞代謝或細(xì)菌污染的副產(chǎn)品，而紫色或粉紅色調(diào)則表明更堿性的環(huán)境。

5.2.廢棄培養(yǎng)物的標(biāo)準(zhǔn)

• 污染指標(biāo)：警惕污染跡象，例如培養(yǎng)基渾濁、意外的 pH 變化或微生物菌落的存在。污染物可以是細(xì)菌、真菌或病毒，每種類型都有不同的視覺(jué)線索，例如細(xì)菌膜或真菌菌絲。

• 形態(tài)異常：如果細(xì)胞表現(xiàn)出與正常生長(zhǎng)或分化無(wú)關(guān)的持續(xù)形態(tài)異常變化，則可能需要丟棄培養(yǎng)物。這包括廣泛的細(xì)胞變圓、脫離或細(xì)胞碎片的存在。

• 不可逆應(yīng)激跡象：尋找不可逆應(yīng)激或毒性的跡象，例如空泡形成、膜起泡或凋亡小體。這些通常是細(xì)胞死亡的前兆，并可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

• 生長(zhǎng)條件退化：如果培養(yǎng)物已達(dá)到匯合或過(guò)度生長(zhǎng)，導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)耗盡和廢物積累，則應(yīng)將培養(yǎng)物進(jìn)行傳代培養(yǎng)或丟棄，以避免對(duì)細(xì)胞健康產(chǎn)生負(fù)面影響。

6. 傳代策略

傳代培養(yǎng)或分裂細(xì)胞是細(xì)胞培養(yǎng)的常規(guī)部分，涉及將細(xì)胞培養(yǎng)物的一部分轉(zhuǎn)移到新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中以繁殖培養(yǎng)物。仔細(xì)的規(guī)劃和執(zhí)行對(duì)于此過(guò)程的成功至關(guān)重要。以下是一些有效傳代的增強(qiáng)策略：

計(jì)劃分割

• 最佳分流比：根據(jù)細(xì)胞系特征、生長(zhǎng)速率和培養(yǎng)物的預(yù)期用途確定理想分流比。對(duì)于快速生長(zhǎng)的細(xì)胞，這可能涉及 1:2 的分割；對(duì)于生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞系，可能需要 1:10 的分割。

• 供應(yīng)商規(guī)格：請(qǐng)參閱供應(yīng)商的產(chǎn)品表，了解針對(duì)每個(gè)細(xì)胞系的具體建議，其中通常包括詳細(xì)的傳代培養(yǎng)方案和細(xì)胞所需的條件。

• 培養(yǎng)的連續(xù)性：維護(hù)主細(xì)胞庫(kù)并使用一致的傳代培養(yǎng)程序，以確保細(xì)胞系的壽命和遺傳穩(wěn)定性。

7. 介質(zhì)維護(hù)

及時(shí)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)：應(yīng)在細(xì)胞耗盡必需營(yíng)養(yǎng)之前更換培養(yǎng)基，這對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝功能至關(guān)重要。

pH 值和毒素控制：定期改變可防止代謝副產(chǎn)物的積累并維持對(duì)細(xì)胞健康至關(guān)重要的生理 pH 值。

8. 通道數(shù)控制

傳代限制：保留細(xì)胞傳代的詳細(xì)日志。頻繁傳代會(huì)導(dǎo)致遺傳漂變，從而改變細(xì)胞表型和行為。通過(guò)限制傳代次數(shù)，可以保持細(xì)胞系的遺傳穩(wěn)定性和完整性。

傳代數(shù)記錄：每次細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)，記錄傳代數(shù)。該信息對(duì)于跟蹤細(xì)胞系歷史和識(shí)別細(xì)胞行為中潛在的傳代相關(guān)變化至關(guān)重要。

9. 確保細(xì)胞系完整性

• 驗(yàn)證記錄：定期驗(yàn)證細(xì)胞系身份（例如，通過(guò)短串聯(lián)重復(fù)（STR）分析）并在記錄中對(duì)此進(jìn)行注釋，以確保在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中使用正確的細(xì)胞系。

• 突變監(jiān)測(cè)：如果可能，監(jiān)測(cè)可能表明遺傳漂變或細(xì)胞系污染的關(guān)鍵遺傳或表型變化，并保存這些記錄以供參考。