iLite ®技術(shù)

適用于整個(gè)藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程的多功能工具

iLite技術(shù)基于報(bào)告基因檢測(cè)格式，為整個(gè)藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程以及生物藥物監(jiān)測(cè)的應(yīng)用提供了無(wú)縫解決方案。  

該技術(shù)幾乎可以針對(duì)任何藥物靶標(biāo)進(jìn)行開(kāi)發(fā)，并提供一種簡(jiǎn)單、快速和準(zhǔn)確的測(cè)試格式，用于測(cè)量和量化藥物活性和免疫原性。細(xì)胞以 Assay Ready 格式提供，無(wú)需細(xì)胞培養(yǎng)，并允許在部門(mén)之間或第三方合作者之間無(wú)縫轉(zhuǎn)移檢測(cè)。

通過(guò)將歸一化讀數(shù)和嵌合轉(zhuǎn)錄因子等功能與高度靈活的產(chǎn)品格式相結(jié)合，iLite技術(shù)可幫助您充分利用生物測(cè)定。

工作原理 - iLite ®基于細(xì)胞的技術(shù)原理

iLite基于細(xì)胞的檢測(cè)基于簡(jiǎn)單的報(bào)告基因技術(shù)。對(duì)特定靶標(biāo)或配體具有特異性的受體在細(xì)胞表面表達(dá)。一旦配體與受體結(jié)合，就會(huì)觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)級(jí)聯(lián)，從而導(dǎo)致啟動(dòng)子區(qū)域與報(bào)告基因融合，在本例中為螢火蟲(chóng)熒光素酶。 

報(bào)告基因的激活以及底物的添加將產(chǎn)生光。光量與與受體結(jié)合的配體的量和活性相關(guān)。

雙報(bào)告基因系統(tǒng)

當(dāng)配體與其受體結(jié)合時(shí)，特定的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑被激活，觸發(fā)編碼熒光素酶的特定報(bào)告基因構(gòu)建體的轉(zhuǎn)錄。當(dāng)添加底物時(shí)，熒光素酶產(chǎn)生光，然后可以使用光度計(jì)將熒光素酶的量以及由此配體的量和活性測(cè)量為光發(fā)射。

iLite細(xì)胞是它們還包含第二個(gè)報(bào)告基因，該基因受組成型啟動(dòng)子控制，這意味著它在任何活細(xì)胞中連續(xù)表達(dá)。換句話說(shuō)，第二個(gè)報(bào)告基因產(chǎn)生的光量將與活細(xì)胞的數(shù)量相關(guān)，因此可用于標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果以補(bǔ)償細(xì)胞數(shù)量的差異。

ILITE ADCC 技術(shù) - 它是如何工作的？抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性 (ADCC) 是一種免疫反應(yīng)，其中攜帶 Fc 受體的效應(yīng)細(xì)胞識(shí)別并殺死表面表達(dá)腫瘤或病原體特異性抗原的抗體包被的靶細(xì)胞。許多基于抗體的療法至少部分依賴于它們?cè)诨颊咧姓T導(dǎo) ADCC 的能力。 iLite  ADCC 產(chǎn)品線提供了一種方便而強(qiáng)大的方法來(lái)測(cè)量抗體在體外 引發(fā) ADCC 的功效 。  

基于 Fc 受體、抗體和靶標(biāo)交聯(lián)的發(fā)光

當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞與與其靶細(xì)胞結(jié)合的藥物抗體相互作用時(shí)，ADCC 過(guò)程就會(huì)被觸發(fā)。效應(yīng)細(xì)胞表面上的FcγIIIa (CD16a)受體與抗體的Fc區(qū)結(jié)合，從而在效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞之間建立橋梁。

在形成該橋之后，工程化的效應(yīng)細(xì)胞將通過(guò)細(xì)胞  內(nèi)途徑產(chǎn)生熒光素酶，并專門(mén)從這種交聯(lián)和信號(hào)傳導(dǎo)中產(chǎn)生發(fā)光，而不是像在體內(nèi)情況下那樣裂解靶細(xì)胞。發(fā)光的強(qiáng)度與藥物誘導(dǎo) ADCC 的能力相關(guān)。

與抗體結(jié)合后，效應(yīng)細(xì)胞中的 NFAT、CREB、NfκB、API 和 Jak-STAT 通路被激活。控制螢火蟲(chóng)熒光素酶基因的啟動(dòng)子經(jīng)過(guò)巧妙設(shè)計(jì)，包含所有這些途徑的結(jié)合位點(diǎn)。與僅依賴 NFAT 響應(yīng)啟動(dòng)子的市售報(bào)告基因相比， 這更接近地反映了體內(nèi)FcγRIIIA 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。  

標(biāo)準(zhǔn)化基因可輕松進(jìn)行樣本之間的比較

與大多數(shù)iLite細(xì)胞系一樣，iLite ADCC 效應(yīng)細(xì)胞也具有次級(jí)熒光素酶讀數(shù)，來(lái)自在組成型啟動(dòng)子控制下表達(dá)的熒光素酶基因。這使得能夠根據(jù)細(xì)胞數(shù)量對(duì)每個(gè)單獨(dú)的讀數(shù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，并補(bǔ)償潛在的基質(zhì)效應(yīng)。    

工程化靶細(xì)胞可篩選非特異性激活  

iLite ADCC 系統(tǒng)配備了一套工程同系物 (+) 和 (- )靶細(xì)胞，可以精確、特異性地確定 ADCC 活性的差異。它還可以比較針對(duì)相同抗原的不同治療抗體之間的 ADCC 活性。 

目標(biāo) (+) 細(xì)胞

靶（+）細(xì)胞 已被設(shè)計(jì)為通過(guò)內(nèi)源表達(dá)的過(guò)度激活或通過(guò)插入編碼該抗原的基因來(lái)過(guò)度表達(dá)特定抗原。

這使得抗原在細(xì)胞表面上得到穩(wěn)定且受控的表達(dá)。

目標(biāo) (-) 細(xì)胞

目標(biāo) (-) 細(xì)胞 基于與目標(biāo) (+) 細(xì)胞相同的細(xì)胞背景，但不呈現(xiàn)特定的表面目標(biāo)分子。因此，效應(yīng)器和靶細(xì)胞之間無(wú)法通過(guò)抗體建立交聯(lián)，并且不會(huì)產(chǎn)生螢火蟲(chóng)熒光素酶的發(fā)光。

因此，特異性抗原陰性靶細(xì)胞提供了一種檢測(cè)和校正有時(shí)在人血清樣品中觀察到的非特異性效應(yīng)的方法。