用于干細(xì)胞（hESC 或 iPS）培養(yǎng)的耐熱 FGF2

干細(xì)胞培養(yǎng)中需要 FGF2（也稱為 FGF-basic 或 bFGF）來(lái)維持干細(xì)胞處于未分化和多能狀態(tài)。然而，F(xiàn)GF basic 不穩(wěn)定，需要每天更換培養(yǎng)基并添加新的 FGF basic，這是昂貴、乏味且耗時(shí)的。為了克服這個(gè)問(wèn)題，開(kāi)發(fā)了 FGF basic 的熱穩(wěn)定版本，以支持 2 天介質(zhì)更換協(xié)議，而不是每日介質(zhì)更換。為期 2 天的培養(yǎng)基更換方案使干細(xì)胞研究人員無(wú)需在周末返回實(shí)驗(yàn)室，使其成為干細(xì)胞研究人員的理想選擇。耐熱 FGF2 經(jīng)過(guò)精心設(shè)計(jì)，可增強(qiáng)在培養(yǎng)基中的穩(wěn)定性，而不影響其生物學(xué)功能。

熱穩(wěn)定性 FGF2 (FGFbasic-TS) 在細(xì)胞培養(yǎng)基中的穩(wěn)定性

當(dāng)在 37° 的典型干細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng) 2 天后，相當(dāng)數(shù)量 (35%) 的熱穩(wěn)定 FGF2 (SPEED SKU# SDP1025) 在培養(yǎng)基中保持完整，而常規(guī) FGF2 (SPEED SKU# YCP1143)第一天后就無(wú)法檢測(cè)到。結(jié)果表明，熱穩(wěn)定 FGF2 的降解速度比常規(guī) FGF 堿性慢約 3 倍。

耐熱 FGF2 對(duì)酶消化的抗性

當(dāng)暴露于胰蛋白酶時(shí)，F(xiàn)GF2 在 4.5 小時(shí)后顯著降解，而 FGF2-TS（熱穩(wěn)定）水平僅略有降低。值得注意的是，肝素可保護(hù) FGF2 和 FGF2-TS 免受胰蛋白酶消化。與 FGF basic 相比，熱穩(wěn)定 FGF basic 更能抵抗蛋白水解降解。

熱穩(wěn)定性 FGF2 (FGFbasic-TS) 通過(guò) 2 天喂養(yǎng)計(jì)劃維持干細(xì)胞的多能性

采用兩天喂養(yǎng)方案，無(wú)論細(xì)胞是人胚胎干細(xì)胞（hESC）還是誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC），干細(xì)胞的多能性在傳代10次后都能得到有效維持；使用非酶?jìng)鞔芤?(XFPS) 或使用膠原基試劑 (CG) 進(jìn)行傳代；在化學(xué)成分確定的基質(zhì) (XFM) 或基質(zhì)膠 (MG) 中培養(yǎng)。通過(guò)對(duì)干細(xì)胞標(biāo)記物（包括 SSEA-4、Tra1-60、Tra1-81 和 Oct3/4）進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)分析來(lái)證實(shí)多能性。

熱穩(wěn)定性 FGF2 維持 FGF2 促進(jìn)干細(xì)胞增殖的活性

通過(guò)兩天的喂養(yǎng)方案，iPSC 細(xì)胞培養(yǎng)物即使在傳代 10 次后仍保持健康的生長(zhǎng)特性。下圖分別顯示了培養(yǎng)第2天和第6天的iPS細(xì)胞。

熱穩(wěn)定 FGF2 (FGFbasic-TS) 不會(huì)誘發(fā)遺傳異常

干細(xì)胞培養(yǎng)物在長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)遺傳異常。在使用 10 mg/mL FGFbasic-TS 的 2 天喂養(yǎng)計(jì)劃中，iPS 細(xì)胞系在第 10 次傳代后在核型分析中保持正常。